NOM-181-SSA1-1998

<body topmargin=0 leftmargin=0 marginheight=0 marginwidth=0> <table cellpadding=0 cellspacing=0 border=0><tr> <td valign="top" rowspan="2" width=200 BGCOLOR="#99CC99" TEXT="#080000" bgproperties="fixed" background="04bd8c03.jpg"> <div> <I>PRODUCTOS</I></div> <div> <A HREF="agua_purificada_en_garrafon__botella_personalizada.htm" TARGET="_top" TITLE="Agua Purificada">Agua Purificada</A></div> <div> <A HREF="agua_destilada__bidestilada_y_desionizada.htm" TARGET="_top" TITLE="Agua destilada">Agua destilada</A></div> <div> <A HREF="purificadoras_de_agua.htm" TARGET="_top" TITLE="Plantas Purificadoras de agua">Plantas Purificadoras de agua</A></div> <div> <A HREF="filtros_multimedia_lecho_pro.htm" TARGET="_top" TITLE="Filtros Multimedia (lecho profundo)">Filtros Multimedia (lecho profundo)</A></div> <div> <A HREF="filtros_de_carbon_activado.htm" TARGET="_top" TITLE="Filtros de Carbon Activado">Filtros de Carbon Activado</A></div> <div> <A HREF="filtros_de_cartucho.htm" TARGET="_top" TITLE="Filtros de Cartucho">Filtros de Cartucho</A></div> <div> <A HREF="suavizadores.htm" TARGET="_top" TITLE="Suavizadores">Suavizadores</A></div> <div> <A HREF="desmineralizadores__desionizadores.htm" TARGET="_top" TITLE="Desmineralizadores">Desmineralizadores</A></div> <div> <A HREF="ozono__ozonadores__ozonacion__.htm" TARGET="_top" TITLE="Ozonadores">Ozonadores</A></div> <div> <A HREF="cloradores.htm" TARGET="_top" TITLE="Cloradores">Cloradores</A></div> <div> <A HREF="luz_ultravioleta.htm" TARGET="_top" TITLE="Luz Ultravioleta">Luz Ultravioleta</A></div> <div> <A HREF="aguas_residuales.htm" TARGET="_top" TITLE="Aguas residuales">Aguas residuales</A></div> <div> <A HREF="osmosis_inversa__.htm" TARGET="_top" TITLE="Osmosis Inversa">Osmosis Inversa</A></div> <div> <A HREF="contctenos.htm" TARGET="_top" TITLE="Contáctenos"><B><IMG BORDER="0" SRC="Symb075c00b700c8ffffff00.png" HEIGHT="13" WIDTH="24" ALIGN="bottom" HSPACE="0" VSPACE="0">Contáctenos</B></A></div> <bR> <bR> </td> <td valign="top" colspan=2 height=82 style=" border-bottom: 1px solid #FFFFFF;" BGCOLOR="#FFFFFF" TEXT="#080000" bgproperties="fixed" background="04c11b51egerdp.jpg"> <div> <FONT SIZE="5" COLOR="#FFFFFF" FACE="Arial Black" ><I>Plantas Purificadoras, Osmosis Inversa, Agua destilada y mas</I></FONT><I>     </I><I>|</I><I>    </I><FONT SIZE="3" COLOR="#FFFFFF" FACE="Arial" ><I><B> </B></I><A HREF="index.htm" TARGET="_top" TITLE="Plantas Purificadoras, Osmosis Inversa, "><I><B>Regresar a pagina de inicio</B></I></A></FONT></div> <div> <I><B>Aquarent, S.A. de C.V. Chihuahua 136 Col. Sta Teresa Magdalena Contreras Mexico D.F. Tel 56523766 Fax 51353270</B></I></div> <div> </div> </td> </tr><tr> <td valign="top" height=398 width="100%" colspan=2 BGCOLOR="#CCCC99" TEXT="#080000" bgproperties="fixed" background="058ddb03.gif"> <div> <I><B>NOM-181-SSA1-1998</B></I></div> <div> <B>NORMA Oficial Mexicana NOM-181-SSA1-1998, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Requisitos sanitarios que deben cumplir las sustancias germicidas para tratamiento de agua, de tipo doméstico.</B></div> <div> <B>Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretaría de Salud.- Subsecretaría de Regulación y Fomento Sanitario.- Dirección General de Salud Ambiental.</B></div> <div> <B>NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-181-SSA1-1998, SALUD AMBIENTAL. AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO. REQUISITOS SANITARIOS QUE DEBEN CUMPLIR LAS SUSTANCIAS GERMICIDAS PARA TRATAMIENTO DE AGUA, DE TIPO DOMESTICO.</B></div> <div> <B>JAVIER CASTELLANOS COUTIÑO, Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, con fundamento en los artículos 39 de la Ley Orgánica de la Administración Pública Federal, 4o. y 69-H de la Ley Federal de Procedimiento Administrativo; 13 apartado A) fracción I, 118 fracción II y 119 fracción II de la Ley General de Salud; 25 del Reglamento Interior de la Secretaría de Salud; 41, 43, 45, 46 fracción II, y 47 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 28 y 24 del Reglamento de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización; 214 fracción IV y 225 del Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios, y</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>CONSIDERANDO</B></div> <div> <B>Que con fecha 16 de diciembre de 1999, en cumplimiento del acuerdo del Comité y de lo previsto en el artículo 47 de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización, se publicó en el Diario Oficial de la Federación el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana a efecto que dentro de los sesenta días naturales posteriores a dicha publicación, los interesados presentaran sus comentarios al Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario.</B></div> <div> <B>Que con fecha 20 de junio de 2000, fueron publicadas en el Diario Oficial de la Federación las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comité, en términos del artículo 47 fracción III de la Ley Federal sobre Metrología y Normalización.</B></div> <div> <B>Que en atención a las anteriores consideraciones, contando con la aprobación del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, se expide la siguiente</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>NORMA OFICIAL MEXICANA PROY-NOM-181-SSA1-1998, SALUD AMBIENTAL, AGUA PARA USO</B></div> <div> <B>Y CONSUMO HUMANO. REQUISITOS SANITARIOS QUE DEBEN CUMPLIR LAS SUSTANCIAS GERMICIDAS PARA TRATAMIENTO DE AGUA, DE TIPO DOMESTICO</B></div> <div> <B>PREFACIO</B></div> <div> <B>En la elaboración de esta Norma Oficial Mexicana participaron las unidades administrativas e instituciones siguientes:</B></div> <div> <B>SECRETARIA DE SALUD.</B></div> <div> <B>Dirección General de Salud Ambiental.</B></div> <div> <B>Laboratorio Nacional de Salud Pública.</B></div> <div> <B>INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL.</B></div> <div> <B>Centro de Investigación y Estudios Avanzados.</B></div> <div> <B>PROCURADURIA FEDERAL DEL CONSUMIDOR.</B></div> <div> <B>Dirección de Investigaciones Físico Tecnológicas.</B></div> <div> <B>DISTRIBUIDORA "LA FUENTE".</B></div> <div> <B>G. V. PRODUCTOS.</B></div> <div> <B>ORVIC DE MEXICO, S.A. DE C.V.</B></div> <div> <B>ROLAND DE MEXICO, S.A. DE C.V.</B></div> <div> <B>COMERCIALIZADA JUMBO, S.A. de C.V.</B></div> <div> <B>AMERICAN QUALITY LAB.</B></div> <div> <B>INSTAPURA, S.A. DE C.V.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>INDICE</B></div> <div> <B>0. Introducción</B></div> <div> <B>1. Objetivo</B></div> <div> <B>2. Campo de aplicación</B></div> <div> <B>3. Referencias</B></div> <div> <B>4. Definiciones</B></div> <div> <B>5. Símbolos y abreviaturas</B></div> <div> <B>6. Especificaciones</B></div> <div> <B>7. Concordancia con normas internacionales y mexicanas</B></div> <div> <B>8. Bibliografía</B></div> <div> <B>9. Observancia de la norma</B></div> <div> <B>10. Vigencia</B></div> <div> <B>Apéndice Normativo A</B></div> <div> <B>Apéndice Informativo A</B></div> <div> <B>Apéndice Informativo B</B></div> <div> <B>0. Introducción</B></div> <div> <B>El objetivo de los programas de abastecimiento de agua para uso y consumo humano, es asegurar que toda la población alcance una dotación adecuada de agua de buena calidad. En México, en la práctica no se han alcanzado estas metas, por lo que un elevado número de usuarios recurre a métodos intradomiciliarios para subsanar deficiencias de la calidad del agua suministrada a nivel municipal.</B></div> <div> <B>Los métodos intradomiciliarios o domésticos para purificar el agua de consumo humano, consisten en la aplicación de equipos potabilizadores y sustancias germicidas, orientados fundamentalmente al aspecto bacteriológico, considerado como de riesgo inmediato a la salud y en casos específicos a la depuración de características físicas y/o químicas.</B></div> <div> <B>1. Objetivo</B></div> <div> <B>1.1 Esta Norma Oficial Mexicana establece las características que deben cumplir las sustancias germicidas para tratamiento de agua, de tipo doméstico.</B></div> <div> <B>2. Campo de aplicación</B></div> <div> <B>Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria en el territorio nacional para las personas físicas o morales que se dediquen al proceso e importación de las sustancias germicidas tipo doméstico para el tratamiento de agua.</B></div> <div> <B>3. Referencias</B></div> <div> <B>Para la correcta aplicación de esta Norma, es necesario consultar las siguientes normas oficiales mexicanas:</B></div> <div> <B>3.1 NOM-014-SSA1-1993 Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano distribuida por sistemas de abastecimiento públicos y privados.</B></div> <div> <B>3.2 NOM-041-SSA1-1993 Agua purificada envasada. Especificaciones sanitarias.</B></div> <div> <B>3.3 NOM-092-SSA1-1994 Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa.</B></div> <div> <B>3.4 NOM-110-SSA1-1993 Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis bacteriológico.</B></div> <div> <B>3.5 NOM-112-SSA1-1994 Determinación de bacterias coliformes. Técnica del número más probable.</B></div> <div> <B>3.6 NOM-127-SSA1-1994 Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización.</B></div> <div> <B>3.7 NOM-008-SCFI-1993 Sistema general de unidades de medida.</B></div> <div> <B>4. Definiciones</B></div> <div> <B>Para efectos de esta Norma Oficial Mexicana se entiende por:</B></div> <div> <B>4.1 Bactericida, a la sustancia o medio que mata o destruye bacterias.</B></div> <div> <B>4.2 Bacteriostático, a la sustancia o medio que tiene la capacidad de inhibir el crecimiento de bacterias, sin matarlas o destruirlas.</B></div> <div> <B>4.3 Germicida, al agente químico que destruye microorganismos especialmente patógenos, lo que no necesariamente incluye la capacidad de destrucción de esporas.</B></div> <div> <B>4.4 Método de prueba, al procedimiento analítico utilizado en el laboratorio para comprobar que un producto satisface las especificaciones que establece la norma.</B></div> <div> <B>5. Símbolos y abreviaturas</B></div> <div> <B>El significado de los símbolos y abreviaturas utilizados en esta Norma es el siguiente:</B></div> <div> <B>5.1 °C grado Celsius</B></div> <div> <B>5.2 g gramo</B></div> <div> <B>5.3 l</B><FONT SIZE="3" COLOR="#FFFFFF" FACE="Arial" ><B> </B></FONT><B>litro</B></div> <div> <B>5.4 ml mililitro</B></div> <div> <B>5.5 mm milímetro</B></div> <div> <B>5.6 nm nanómetro</B></div> <div> <B>5.7 NMP número más probable</B></div> <div> <B>5.8 pH potencial de hidrógeno</B></div> <div> <B>5.9 UFC unidades formadoras de colonias</B></div> <div> <B>5.10 % porciento</B></div> <div> <B>6. Especificaciones</B></div> <div> <B>6.1 Las personas físicas o morales que se dediquen al proceso e importación de sustancias germicidas para el tratamiento de agua, de tipo doméstico, deben tener a disposición de la autoridad sanitaria competente, un informe de resultados de laboratorio sobre prueba de potabilidad, de cada sustancia en particular, de conformidad con el método de prueba de eficiencia antimicrobiana de sustancias germicidas miscibles en agua, descrito en el apéndice normativo A de esta Norma. El laboratorio que efectúe la prueba debe ser acreditado o tercero autorizado.</B></div> <div> <B>La prueba de potabilidad es aceptable, cuando el porcentaje DE reducción bacteriana es igual o mayor a 95% para organismos mesófilos aerobios e igual o mayor a 99.99% para organismos coliformes totales.</B></div> <div> <B>6.2 La Secretaría de Salud determinará de acuerdo con el dictamen correspondiente, o a solicitud fundamentada técnicamente de dependencias, organismos oficiales y empresas privadas, o por queja, cuando el agua tratada por medio de una sustancia germicida para el tratamiento de agua, de tipo doméstico, complementariamente a la prueba de eficiencia antimicrobiana, deba ser sometida a análisis de sustancias tóxicas provenientes de los ingredientes que componen dicha sustancia.</B></div> <div> <B>6.3 Las sustancias germicidas para el tratamiento de agua, de tipo doméstico, deben ostentar en la etiqueta o contraetiqueta, la siguiente leyenda: Utilizar con agua de abastecimiento público.</B></div> <div> <B>6.4 La etiqueta o contraetiqueta del producto, debe contener cuando menos la siguiente información en español:</B></div> <div> <B>6.4.1 Finalidad de uso.</B></div> <div> <B>6.4.2 Instrucciones de uso.</B></div> <div> <B>6.5 Las personas físicas o morales referidas en el punto 6.1 de este apartado, deben tener a disposición de la autoridad sanitaria cuando ésta la requiera, la siguiente información:</B></div> <div> <B>6.5.1 Ingredientes activos del producto.</B></div> <div> <B>6.5.2 País de origen de los ingredientes activos del producto o, en su caso, indicar si es en su totalidad de importación; para este último caso, se debe señalar la fracción arancelaria comprendida en la tarifa de la Ley del Impuesto General de Importación.</B></div> <div> <B>6.5.3 Etiqueta del producto en español.</B></div> <div> <B>7. Concordancia con normas internacionales y mexicanas</B></div> <div> <B>Esta Norma Oficial Mexicana no es equivalente a ninguna norma internacional, pero sí es equivalente en parte con la NMX-CC-1-1993, Sistemas de calidad-Vocabulario.</B></div> <div> <B>8. Bibliografía</B></div> <div> <B>8.1 Bacteriological Analitical Manual C. 5th. Edition. Food and Drug Administration. Division of Microbiology. 1978.</B></div> <div> <B>8.2 Manual de Técnicas y Procedimientos de Laboratorio para Análisis Microbiológicos de Agua Potable. Secretaría de Salud. Subsecretaría de Servicios de Salud D.G.E. Laboratorio Nacional de Salud Pública. Reimpresión. México, D.F. 1989.</B></div> <div> <B>8.3 Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. Thirteen Ed., 1980. Washington D.C.</B></div> <div> <B>8.4 Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 1995. Washington D.C.</B></div> <div> <B>8.5 Procedimiento Normalizado de Operación PNO-RMPM-001 para la Evaluación de Germicidas. Laboratorio Nacional de Salud Pública. Departamento de Evaluación de Riesgos Microbianos y Parasitarios. S.S.A. México, D.F. 1995.</B></div> <div> <B>8.6 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 14th. Ed. Washington D.C. 1975 pp. 875-880.</B></div> <div> <B>8.7 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 17th. Ed. Washington D.C. 1992.</B></div> <div> <B>8.8 Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association. 18th. Ed. Washington D.C. 1995.</B></div> <div> <B>9. Observancia de la norma</B></div> <div> <B>La vigilancia en el cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud y a los gobiernos de las entidades federativas, en sus respectivos ámbitos de competencia.</B></div> <div> <B>10. Vigencia</B></div> <div> <B>La presente Norma Oficial Mexicana estará vigente a los 60 días naturales después de su publicación en el Diario Oficial de la Federación.</B></div> <div> <B>Sufragio Efectivo. No Reelección.</B></div> <div> <B>México, D.F., a 20 de septiembre de 2000.- El Presidente del Comité Consultivo Nacional de Normalización de Regulación y Fomento Sanitario, Javier Castellanos Coutiño.- Rúbrica.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>APENDICE NORMATIVO A</B></div> <div> <B>METODO DE PRUEBA DE EFICIENCIA ANTIMICROBIANA DE SUSTANCIAS</B></div> <div> <B>GERMICIDAS MISCIBLES EN AGUA</B></div> <div> <B>1. Introducción.- La eficiencia de una sustancia germicida está dada por su capacidad para destruir o matar una carga microbiana presente en el agua. Esta eficiencia está basada en su poder germicida a través de sus componentes químicos y su efecto sobre las bacterias de acuerdo con su concentración y tiempo de contacto.</B></div> <div> <B>2. Objetivo.- Determinar si la sustancia germicida cumple con las propiedades que le son atribuidas por el fabricante, bajo las condiciones de aplicación, indicadas por el mismo.</B></div> <div> <B>3. Método.- Se inocula una fuente de agua con un número conocido de colonias del microorganismo seleccionado, para probar la eficiencia de la sustancia germicida. Posteriormente el agua se somete a la acción de dicha sustancia germicida, bajo las condiciones indicadas en el instructivo proporcionado por el fabricante.</B></div> <div> <B>Se toman muestras del agua de prueba antes y después de haberse sometido al tratamiento, de acuerdo con la NOM-014-SSA1-1993, Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano distribuida por sistemas de abastecimiento públicos y privados. A continuación se determina en dichas muestras la concentración de organismos mesofílicos aerobios y coliformes totales.</B></div> <div> <B>4. Material y equipo</B></div> <div> <B>4.1 Autoclave provisto de termómetro y/o manómetro, capaz de alcanzar temperatura de esterilización de 121 ± 2°C, probado con termómetro de máximas.</B></div> <div> <B>4.2 Espectrofotómetro con escala de Transmitancia o Nefelómetro de Mc. Farland.</B></div> <div> <B>4.3 Horno para esterilizar a 160 - 180°C.</B></div> <div> <B>4.4 Incubadora de aire, con circulación mecánica, para operar a una temperatura de 35 ± 2°C.</B></div> <div> <B>4.5 Baño de agua, con circulación mecánica y mezcla de agua, para operar a una temperatura de 44, ± 0,2°C.</B></div> <div> <B>4.6 Potenciómetro.</B></div> <div> <B>4.7 Pipetas serológicas estériles de 1 y 10 ml de capacidad, con graduación de una décima de su volumen total (Se recomienda contar complementariamente con pipetas de 2, 5 y 11 ml de capacidad).</B></div> <div> <B>4.8 Tubos de cultivo de 22 x 175 mm, 20 x 200 mm, 16 x 160 mm y 10 x 100 mm, con tapa metálica o de rosca.</B></div> <div> <B>4.9 Botellas de Roux.</B></div> <div> <B>4.10 Asa de platino o micromel.</B></div> <div> <B>4.11 Contador manual.</B></div> <div> <B>4.12 Contador de colonias.</B></div> <div> <B>4.13 Cajas de Petri estériles de 100 x 15 mm.</B></div> <div> <B>4.14 Mecheros Fisher o Bunsen.</B></div> <div> <B>4.15 Solución salina estéril al 0,85% (8,5 g de cloruro de sodio, grado analítico en 1000 ml de agua).</B></div> <div> <B>5. Medios de cultivo</B></div> <div> <B>5.1 Agar nutritivo A.</B></div> <div> <B>- Extracto de carne 3,0 g</B></div> <div> <B>- Peptona</B><FONT SIZE="3" COLOR="#FFFFFF" FACE="Arial" ><B>LK19</B></FONT><B> 5,0 g</B></div> <div> <B>- Agar libre de sales 15,0 g</B></div> <div> <B>- Agua destilada 1000,0 ml</B></div> <div> <B>Poner a ebullición durante tres minutos el extracto de carne y la peptona (Bacto o equivalente); agregar el agar y calentar, agitando continuamente hasta disolver.</B></div> <div> <B>Distribuir en tubos de 10 x 100 mm y esterilizar 20 minutos a 121°C (el medio no debe sufrir sobrecalentamiento, lo que se evita por un precalentamiento del autoclave).</B></div> <div> <B>Utilizar este medio para efectuar los subcultivos.</B></div> <div> <B>5.2 Agar nutritivo B.</B></div> <div> <B>Preparar del mismo modo que el Agar nutritivo A, descrito en el punto 5.1 de este apéndice, pero agregando 30 g de agar libre de sales en lugar de los 15 g especificados.</B></div> <div> <B>Distribuir 20 ml del medio en cada botella de Roux.</B></div> <div> <B>Utilizar este medio para preparar el cultivo de referencia.</B></div> <div> <B>6. Microorganismo de prueba</B></div> <div> <B>Cepa de </B><I><B>Escherichia coli</B></I><B> ATCC 11229</B></div> <div> <B>7. Preparación del cultivo de referencia</B></div> <div> <B>Tomar una asada de la cepa de </B><I><B>Escherichia coli </B></I><B>y sembrar en una botella de Roux con Agar nutritivo B; incubar 20-24 horas a una temperatura de 35 ± 2°C. Hacer por lo menos tres siembras.</B></div> <div> <B>8. Preparación del subcultivo</B></div> <div> <B>Tomar una asada de cada cultivo de referencia y resembrar en tubos independientes con Agar nutritivo A; incubar 20-24 horas a una temperatura de 35 ± 2°C.</B></div> <div> <B>9. Preparación de la suspensión de </B><I><B>Escherichia coli</B></I></div> <div> <B>9.1 A partir del subcultivo en tubo ya desarrollado, adicionar 5 ml de solución salina al 0,85% estéril y agitar suavemente en forma manual, rotando verticalmente el tubo entre las dos manos, para obtener una suspensión bacteriana, la cual se transfiere a un tubo estéril.</B></div> <div> <B>9.2 Determinación de la concentración de organismos mesófilos aerobios en la suspensión de </B><I><B>Escherichia coli</B></I><B>, utilizando uno de los dos métodos que se presentan en los puntos 9.2.1 y 9.2.2 de este apéndice.</B></div> <div> <B>9.2.1 Método espectrofotométrico.</B></div> <div> <B>Determinar la concentración de bacterias en UFC/ml, utilizando la Tabla 1.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>Tabla 1</B></div> <div> <B> <TABLE BORDER="2" CELLPADDING="1" CELLSPACING="1" WIDTH="608" BORDERCOLORLIGHT="#C0C0C0" BORDERCOLORDARK="#808080" FRAME="BOX" RULES="ALL" HSPACE="0" VSPACE="0" > <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 39 WIDTH="56"><div> <B>370</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>420</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>490</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>530</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>550</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>580</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>650</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>LONGITUD DE ONDA EN nm</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER COLSPAN=7 HEIGHT= 20 WIDTH="410"><div> <B>% TRANSMITANCIA CON FILTROS</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>UFC/ml x 109</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>4,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>6,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>6,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>6,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>13,0</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>5,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>11,5</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>6,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>10,2</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>7,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>11,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>8,6</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>11,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>8,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>10,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>12,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>13,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>7,7</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="56"><div> <B>13,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>12,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>12,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>12,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>13,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="56"><div> <B>15,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="171"><div> <B>6,7</B></div> </tD> </tR> </TABLE></B></div> <div> <B>Nota.- La calibración del aparato debe realizarse con solución salina estéril.</B></div> <div> <B>9.2.2 Método nefelométrico.</B></div> <div> <B>Determinar la concentración de bacterias en UFC/ml, utilizando la Tabla 2.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>Tabla 2</B></div> <div> <B> <TABLE BORDER="2" CELLPADDING="1" CELLSPACING="1" WIDTH="591" BORDERCOLORLIGHT="#C0C0C0" BORDERCOLORDARK="#808080" FRAME="BOX" RULES="ALL" HSPACE="0" VSPACE="0" > <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 39 WIDTH="143"><div> <B>Solución de BaCl2 al 1,0% ml</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>Solución de H2SO4 al 1,0% ml</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>Escala de Mc, Farland</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER><NOBR><div> <B>UFC Millones/ml</B></div> </NOBR></tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,1</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,9</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>4,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>300</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,2</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,8</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,7</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>600</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,3</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,7</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,5</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>900</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,4</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,6</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,4</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>1 200</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,5</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,5</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,3</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>1 500</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,6</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,4</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,2</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>1 800</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,7</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,3</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,15</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>2 100</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,8</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,2</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,10</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>2 400</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>0,9</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,1</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,04</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>2 700</B></div> </tD> </tR> <tR> <tD VALIGN=CENTER HEIGHT= 20 WIDTH="143"><div> <B>1,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>9,0</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="137"><div> <B>3,00</B></div> </tD> <tD VALIGN=CENTER WIDTH="143"><div> <B>3 000</B></div> </tD> </tR> </TABLE></B></div> <div> <B>9.3 Diluir la suspensión bacteriana con solución salina estéril al 0,85%, a la transmitancia o turbiedad elegida, de acuerdo con la concentración de bacterias establecida.</B></div> <div> <B>10. Preparación de agua de prueba</B></div> <div> <B>10.1 El agua de prueba se debe preparar con agua de sistema de abastecimiento público, debiendo cumplir con los límites permisibles de la NOM-127-SSA1-1994, Salud ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización, en los parámetros que incidan o afecten la eficiencia del producto germicida, conforme al contenido de la etiqueta o instructivo respectivo, proporcionado por el fabricante o distribuidor al laboratorio acreditado que efectúe la prueba.</B></div> <div> <B>10.2 Preparar un litro de agua de prueba, libre de bactericidas y bacteriostáticos, inoculando el volumen de suspensión de </B><I><B>Escherichia coli </B></I><B>requerido, para alcanzar una carga total de bacterias de 5 000 a 10 000 UFC/ml y una concentración de organismos coliformes totales mayor o igual a 240 NMP/100 ml o UFC/100 ml.</B></div> <div> <B>10.3 Determinar para el agua de prueba la concentración real de organismos mesófilos aerobios en UFC/ml de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa y la concentración real de organismos coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994, Determinación de bacterias coliformes. Técnica del número más probable o con los métodos alternativos presentados en los Apéndices Informativos A y B.</B></div> <div> <B>11. Desarrollo de la prueba</B></div> <div> <B>11.1 Agregar la sustancia germicida al agua de prueba, de acuerdo con las instrucciones del fabricante o distribuidor, especificadas en la etiqueta o instructivo del producto.</B></div> <div> <B>11.2 Después de transcurrido el tiempo de contacto especificado en la etiqueta o instructivo del producto, tomar tres muestras de agua de prueba sin tratar y, a continuación, tres muestras de agua tratada; determinar la concentración de organismos mesófilos aerobios en UFC/ml de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994 y la concentración de organismos coliformes totales de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana NOM-112-SSA1-1994 o con los métodos alternativos presentados en los Apéndices Informativos A y B.</B></div> <div> <B>12. Cálculos</B></div> <div> <B>Con los resultados de cuenta de organismos mesófilos aerobios y la concentración de organismos coliformes totales en agua de prueba sin tratar y tratada (media aritmética), calcular los porcentajes en la reducción bacteriana de acuerdo con las fórmulas especificadas en los puntos 12.1 y 12.2 de este apéndice.</B></div> <div> <B>12.1 Porcentaje en reducción bacteriana de organismos mesófilos aerobios:</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>(organismos mesófilos aerobios)</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT><B> - (organismos mesófilos aerobios)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APT</B></FONT></div> <div> <B>% RBMA =---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- X 100</B></div> <div> <B>(organismos mesófilos aerobios)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT></div> <div> <B>En donde:</B></div> <div> <B>% RBMA.- Porcentaje en reducción bacteriana de organismos mesófilos aerobios.</B></div> <div> <B>(organismos mesófilos aerobios)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT><B>.- Cuenta de organismos mesófilos aerobios en UFC/ml de agua de prueba sin tratar.</B></div> <div> <B>(organismos mesófilos aerobios)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APT</B></FONT><B>.- Cuenta de organismos mesófilos aerobios en UFC/ml de agua de prueba tratada.</B></div> <div> <B>12.2 Porcentaje en reducción bacteriana de organismos coliformes totales.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>(coliformes totales)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT><B> - (coliformes totales)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APT</B></FONT></div> <div> <B>% RBCT = ------------------------------------------------------------------------------- X 100</B></div> <div> <B>(coliformes totales)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT></div> <div> <B>En donde:</B></div> <div> <B>% RBCT.- Porcentaje en reducción bacteriana de organismos coliformes totales.</B></div> <div> <B>(coliformes totales)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APST</B></FONT><B>.- Cuenta de organismos coliformes totales en NMP/100 ml o UFC/100 ml de agua de prueba sin tratar.</B></div> <div> <B>(coliformes totales)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Univers" ><B>APT</B></FONT><B>.- Cuenta de organismos coliformes totales en NMP/100 ml o UFC/100 ml de agua de prueba tratada.</B></div> <div> <B>13. Reporte</B></div> <div> <B>Prueba de potabilidad aceptable, si el porcentaje en reducción bacteriana es igual o mayor a 95% para organismos mesófilos aerobios e igual o mayor a 99,99% para organismos coliformes totales.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>APENDICE INFORMATIVO A</B></div> <div> <FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>DETERMINACION de organismos coliformes totales. METODO del sustrato CROMOGENICO </B></FONT><B>(ver Nota</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="CG Palacio (WN)" ><B>1</B></FONT><B> a pie de página)</B></div> <div> <B>1. Introducción</B></div> <div> <B>La determinación de organismos coliformes por medio del sustrato cromogénico, se fundamenta en el uso de sustratos cromogénicos hidrolizables para la detección de enzimas de bacterias coliformes. Cuando se utiliza esta técnica, el grupo se define como todas las bacterias que poseen la enzima ß-D-galactosidasa y capaces de romper el sustrato cromogénico, dando como resultado una liberación del cromógeno. A diferencia del método de fermentación de lactosa que permite el crecimiento de muchos organismos aeróbicos y elimina o suprime algunos no-coliformes con inhibidores químicos, esta técnica provee nutrientes que son más selectivos y específicos para el crecimiento de coliformes. La prueba puede usarse tanto en tubos múltiples como en formato presencia-ausencia (muestras individuales de 100 ml). La obtención de resultados válidos requiere la aplicación estricta de los procedimientos de control de calidad.</B></div> <div> <B>2. Principio</B></div> <div> <B>El sustrato cromogénico tal como el orto-nitrofenil-ß-D galactopiranósido (ONPG) u otro equivalente, es empleado para detectar la enzima ß-D-galactosidasa, la cual es producida por bacterias coliformes totales. La enzima ß-D-galactosidasa hidroliza al sustrato y provoca un cambio de color, el cual indica y sustenta una prueba positiva después de 24 a 28 horas sin procedimientos adicionales. Las bacterias no coliformes, tales como las especies del género Aeromonas y Pseudomonas, que producen pequeñas cantidades de la enzima ß-D-galactosidasa, son suprimidas y no pueden producir una respuesta positiva durante las 28 horas a menos de que más de 10</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> (10 000) unidades formadoras de colonias (UFC) por ml (10</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>6</B></FONT><B> UFC/100 ml) estén presentes.</B></div> <div> <B>3. Aplicaciones</B></div> <div> <B>La prueba de coliformes con sustrato cromogénico se recomienda para el análisis de muestras de agua potable, agua purificada o agua limpia proveniente de cualquier fuente. Inicialmente, los laboratorios planearon usar este procedimiento conduciendo pruebas paralelas con una de las pruebas de coliformes estándar por un periodo de varios meses para evaluar la efectividad de la prueba para el tipo específico de agua analizada y para determinar el número relativo de pruebas positivas obtenido por las dos técnicas.</B></div> <div> <B>Las muestras de agua que contienen materiales húmicos o de otro tipo pueden estar coloreadas. Si hay color de fondo, se comparan los tubos inoculados con un tubo de control conteniendo únicamente muestra de agua. Ciertas aguas con alto contenido de sales de calcio pueden causar precipitación, pero ésta no debe afectar la reacción.</B></div> <div> <B>La prueba del sustrato cromogénico no se usa para verificar siembras presuntivas de coliformes o colonias de filtración con membrana porque el sustrato puede ser sobrecargado por el inóculo pesado de ß-D-galactosidasa débil producido por no-coliformes, causando resultados falsos positivos.</B></div> <div> <B>En lo que se refiere a </B><I><B>Echerichia Coli</B></I><B>, un sustrato fluorogénico como el 4-metilumbeliferil-ß-D-glucorónido (MUG) es utilizado para detectar la enzima ß-glucoronidasa, la cual es producida por </B><I><B>E.</B></I><B> </B><I><B>Coli</B></I><B>. La enzima ß-glucoronidasa hidroliza el sustrato, produciendo fluorescencia cuando el líquido es expuesto a la luz ultravioleta de onda larga (366 nm). La presencia de fluorescencia indica una respuesta positiva para </B><I><B>E. coli.</B></I><B> Algunas </B><I><B>Shigella</B></I><B> </B><I><B>spp</B></I><B> también pueden producir una respuesta positiva. Debido a que </B><I><B>Shigella</B></I><B> </B><I><B>spp</B></I><B> son reconocidas como patógenas humanas, no están consideradas como perjudiciales para probar la calidad sanitaria del agua.</B></div> <div> <B>4. Formulación del sustrato</B></div> <div> <B>Las formulaciones del sustrato se presentan comercialmente en tubos para el procedimiento de tubos múltiples o en recipientes para muestras de 100 ml para la determinación de presencia/ausencia. También son aprovechables porciones pre-pesadas del reactivo para mezclar y dosificar en tubos múltiples para pruebas de 10 ml u otros recipientes para muestras de 100 ml. Se requiere de un proveedor confiable para el aseguramiento de calidad y uniformidad del sustrato comercial. Se debe evitar la exposición prolongada del sustrato a la luz directa del sol.</B></div> <div> <B>La formulación en polvo contiene los siguientes compuestos anhidros (por litro de sustrato preparado) (ver Nota </B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>2</B></FONT><B> a pie de página).</B></div> <div> <B>Sulfato de amonio (NH</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B>)</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>2</B></FONT><B>SO</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> 5,00 g</B></div> <div> <B>Sulfato de manganeso, MnSO</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> 0,0005 g</B></div> <div> <B>Sulfato de zinc, ZnSO</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> 0,0005 g</B></div> <div> <B>Sulfato de magnesio, MgSO</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> 0,10 g</B></div> <div> <B>Cloruro de sodio, NaCl 10,0 g</B></div> <div> <B>Cloruro de calcio, CaCl</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>2</B></FONT><B> 0,05 g</B></div> <div> <B>Sulfito de sodio, Na</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>2</B></FONT><B>SO</B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>3</B></FONT><B> 0,04 g</B></div> <div> <B>Amfotericina B 0,001 g</B></div> <div> <B>O-Nitrofenil-ß-D-galactopiranósido 0,50 g</B></div> <div> <B>4-Metilumbeliferil-ß-D-glucorónido 0,075 g</B></div> <div> <B>Solanio (ver Nota </B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>3</B></FONT><B> a pie de página) 0,50 g</B></div> <div> <B>Buffer Hepes de sal de sodio 5,3 g</B></div> <div> <B>Buffer Hepes de ac, orgánicos (ver Nota </B><FONT SIZE="1" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B>4</B></FONT><B> a pie de página) 6,9 g</B></div> <div> <B>5. Procedimiento</B></div> <div> <B>5.1 Procedimiento de tubos múltiples. Seleccione el número apropiado de tubos por muestra con medio predosificado para la prueba de tubos múltiples y rotule. Siga las instrucciones del fabricante para preparar la serie de diluciones. Asépticamente, adicione 10 ml de muestra a cada tubo, tape herméticamente y agite vigorosamente para disolver. La mezcla resultante es incolora. Algunas partículas pueden resultar insolubles durante la prueba, esto no afectará su desarrollo.</B></div> <div> <B>El procedimiento también puede ser desarrollado con la adición de cantidades apropiadas del sustrato reactivo a la muestra, mezclando vigorosamente y dosificando en cinco o diez tubos estériles. Incube a 35 ± 0,5°C por 24 horas.</B></div> <div> <B>5.2 Procedimiento de presencia/ausencia. Adicione asépticamente sustrato enzimático pre-pesado a 100 ml de muestra en un vaso, estéril, transparente, no fluorescente de borosilicato o en una botella o recipiente equivalente. Opcionalmente adicionar 100 ml de muestra al sustrato enzimático en un recipiente provisto por el fabricante. Tape asépticamente y mezcle vigorosamente para disolver. Incube a 35+0,5°C por 24 horas.</B></div> <div> <B>6. Interpretación</B></div> <div> <B>Después de 24 horas de incubación examine si existe cambio de color en los tubos o recipientes. Cuando el sustrato es orto-nitrofenil-ß-D-galactopiranósido (ONPG) es hidrolizado por la enzima de la bacteria para producir ortonitrofenol amarillo; algunos sustratos usados en otras formulaciones pueden producir respuestas de diferente color. La respuesta cromogénica descrita es una reacción positiva para coliformes totales. Si el cambio de color no es uniforme en todo el tubo, mezcle por inversión antes de la lectura. Comparar cada tubo nuevamente con el comparador de color disponible de la fuente comercial del sustrato. Si la intensidad del color es mayor o igual a la del comparador, los coliformes totales están presentes. Las muestras son negativas para coliformes totales si no se observa color. Si la respuesta cromogénica es cuestionable después de 24 horas, incube 4 horas más. Si se intensifica el cromógeno, la muestra es positiva para coliformes totales; si no sucede esto, la muestra es negativa.</B></div> <div> <B>7. Reporte</B></div> <div> <B>Si se desarrolló el procedimiento de NMP, calcular el valor de NMP del número de tubos o celdas positivos, de acuerdo con las tablas de número más probable, correspondientes al sistema utilizado. Si se utiliza el procedimiento de presencia/ausencia, reportar resultados de coliformes totales presentes a ausentes en 100 ml de muestra.</B></div> <div> <B>8. Control de calidad</B></div> <div> <B>Pruebe cada lote de sustrato comercial desarrollando la prueba por inoculación con tres bacterias de control; </B><I><B>Escherichia coli</B></I><B>, otra coliforme total diferente a </B><I><B>E. coli</B></I><B> (por ejemplo </B><I><B>Enterobacter</B></I><B> </B><I><B>cloacae</B></I><B>) y una no coliforme. Evite el uso de inóculos pesados. Si se usan </B><I><B>Pseudomonas</B></I><B> como el no coliforme representativo, seleccione una especie no fluorescente. Incube estos controles a 35 ± 0,5°C por 24 horas. Lea y registre los resultados.</B></div> <div> <B>9. Bibliografía</B></div> <div> <B>Edberg. S.C., M.J. Allen, D.B. Smith & the National Collaborative Study, 1988. National field evaluation of a defined substrate method for the simultaneous enumeration of total coliforms and Escherichia coli from drinking water: Comparison with the standard multiple tube fermentation method. Appl. Environ. Microbiol. 54:1595.</B></div> <div> <B>Edberg, S.C. & M.M. Edberg, 1988. A defined substrate technology for the enumeration of microbial indicators of environmental pollution. Yale J. Biol. Med. 61:389.</B></div> <div> <B>Covert, T.C., L.C. Shadix, E.W. Rice, J.R. Haines & R.W. Frey Berg, 1989. Evaluation of the autoanalysis Colilert test for detection and enumeration of total coliforms. Appl. Environ. Microbiol. 55:2443.</B></div> <div> <B>Edberg, S.C. & D.B. Smith, 1989. Absence of association between total heterotrophic and total coliform bacteria from a public water supply. Appl. Environ. Microbiol 55:380.</B></div> <div> <B>Edberg S.C., M.J. Allen, D.B. Smith & the National Collaborative Study, 1989. National field evaluation of a defined substrate method for the simultaneous detection of total coliforms and Escherichia coli from drinking water: Comparison with presence-absence techniques. Appl. Environ. Microbiol. 55:1003.</B></div> <div> <B>Edberg S.C., M.J. Allen, D.B. Smith & N.J. Kaiz, 1990. Enumeration of total coliforms and Escherichia coli from source water by tha defined substrate technology. Appl. Environ. Microbiol. 56:366.</B></div> <div> <B>Edberg S.C., M.J. Allen, D.B. Smith, 1991. Defined substrate technology method for rapid ans simultaneous enumeration of total coliforms and Escherichia coli from water: Collaborative study. J. Assoc. Offic. Anal. Chem. 74:526.</B></div> <div> <B>Edberg, S.C., F. Ludwig & D.B. Smith, 1991. The Colilert System for total coliforms and Escherichia coli. American Water Works Research Foundation, Denver, Colo.</B></div> <DIV ALIGN="LEFT"></DIV> <div> <B>APENDICE INFORMATIVO B</B></div> <div> <B>DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES</B></div> <div> <B>FECALES-METODO DE FILTRACION POR MEMBRANA</B></div> <div> <B>1. Fundamento</B></div> <div> <B>Este método se basa en la filtración de una muestra para concentrar células viables sobre la superficie de una membrana y transferirlas a un medio de cultivo apropiado, para posteriormente contar el número de unidades formadoras de colonias (UFC) desarrolladas después de la incubación.</B></div> <div> <B>2. Material</B></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Autoclave con termómetro y manómetro, capaz de alcanzar temperaturas de esterilización.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Material para envolver esterilizable (papel kraft, bolsas de polímero resistentes al calor, otros).</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Membranas para filtración estériles con poro de 0,45 milimicras y cojinetes absorbentes de 47 mm de diámetro.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Sistema de filtración.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Sistema de luz ultravioleta para esterilización de las unidades de filtración.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Bomba de vacío (20-27 pulgadas Hg), tubería y aditamentos herméticos para mantener el vacío.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Matraz Kitazato.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Cajas Petri desechables o de vidrio estériles de 50 x 90 mm.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Marcador indeleble o equivalente.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Pinzas de acero inoxidable.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Propipeta de 50 ml de capacidad.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Botellas de borosilicato con capacidad de 150 ml y tapa de rosca.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Pipetas bacteriológicas de 1, 2, 5, 10 y 25 ml de capacidad, estériles y protegidas con tapón de algodón.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Utensilios estériles como: cucharas, cucharones, picahielos, destapadores, abrelatas, entre otros.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Microscopio estereoscópico, óptico o equivalente.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Incubadora ajustada a temperatura de 35ºC ± 1ºC.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Contador mecánico o manual de Tally.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Recipientes estériles para muestras (frascos, botellas, jarras, bolsas, otros).</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Balanza granataria con sensibilidad de 0,1 g.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Portaasa y asa bacteriológica.</B></FONT></div> <div> <B>·</B><FONT SIZE="3" COLOR="#000000" FACE="Arial" ><B> Portaobjetos.</B></FONT></div> <bR> </td> </tr></table></body>